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| 凝胶成像系统概述 |
| 2014/3/29 |
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凝胶成像定义
凝胶成像即对dna/rna/蛋白质等凝胶电泳不同染色(如eb、考马氏亮蓝、银染、sybr green)及微孔板、平皿等非化学发光成像检测分析。
凝胶成像系统可以应用于分子量计算,密度扫描,密度定量, PCR定量等生物工程常规研究。
凝胶成像系统的原理
样品在电泳凝胶或者其他载体上的迁移率不一样，以标准品或者其他的替代标准品相比较就会对未知样品作一个定性分析。这个就是图像分析系统定性的基础。根据未知样品在图谱中的位置可以对其作定性分析，就可以确定它的成份和性质。
样品对投射或者反射光有部分的吸收，从而照相所得到的图像上面的样品条带的光密度就会有差异。光密度于样品的浓度或者质量成线性关系。根据未知样品的光密度，通过于已知浓度的样品条带的光密度指相比较就可以得到未知样品的浓度或者质量。这就是图像分析系统定量的基础。采用最新技术的紫外透射光源和白光透射光源使光的分布更加均匀，最大限度的消除了光密度不均造成的对结果的影响。
凝胶成像应用范围
总体上来说凝胶成像可应用于：凝胶成像系统可以用于：蛋白质、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分离纯化结果作定性分析
(1)分子量定量
对于一般常用的DNA胶片,利用分子量定量功能,通过对胶上DNA Marker条带的已知分子量注释,自动生成拟合曲线,并以它衡量得到未知条带的分子量。通过这种方法所得到的结果较肉眼观察估计要准确很多。
(2)密度定量
一般常用的测定DNA(脱氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)浓度的方法是紫外吸收法,但它只能测定样品中的总核苷酸浓度,而不能区分各个长度片段的浓度。利用凝胶成像系统和软件,先将DNA胶片上某一已知其DNA含量的标准条带进行密度标定以后,可以方便的单击其他未知条带，根据与已知条带的密度做比较，可以得到未知DNA的含量。此方法也适用于对PA GE蛋白胶条带的浓度测定。
(3)密度扫描
在分子生物学和生物工程研究中,最常用到的是对蛋白表达产物占整个菌体蛋白的百分含量的计算。传统的方法是利用专用的密度扫描,但利用生物分析软件结合现在实验室常规配备的扫描仪或者直接用白光照射的凝胶成像就能完成此项工作。
(4)PCR定量
PCR定量主要是指，如果PCR实验扩增出来的条带不是一条，那么可以利用软件计算出各个条带占总体条带的相对百分数。就此功能而言，与密度扫描类似，但实际在原理上并不相同。PCR定量是对选定的几条带进行相对密度定量并计算其占总和的百分数，密度扫描时并对选择区域生成纵向扫描曲线图并积分。
凝胶成像种类
(1)普通凝胶成像分析系统：可以对蛋白电泳凝胶，DNA凝胶样品进行图象采集并进行定性和定量分析，样品包括：EB、SYBR Green、SYBR Gold、Texas Red、GelStar、Fluoroscecin、 Radiant Red等染色的核酸监测;以及Coomassie Blue、SYPRO Orange、各种染色的蛋白质凝胶如考染等。(或UV,EB和有色及可见样品成像);
(2)化学发光成像分析系统：成像范围涵盖UV,EB,化学发光、紫外-荧光、有色及可见样品成像;
(3)多色荧光成像分析系统：成像范围涵盖UV,EB,化学发光、多色荧光荧光、有色及可见样品成像;
(4)多功能活体成像分析系统：UV,EB,化学发光、多色荧光荧光、有色及可见样品成像和离体组织和小型动物，及大型型动物。
凝胶成像特点
高分辨率像素：
140万、200万、300高像素专业数字CCD摄像头，分析图像更清晰，分辨率更高。
推拉工作台：
方便装卸清洁，易于实验操作，人性化设计。
独特的风扇及密闭风道设计：
紫外工作台及主机装备有排风风扇，主机侧壁内有SIM独家专利的密闭排风通道，有效降低室内温度，最大程序减少对榈的影响，避免温度过高使胶弥散动之过快。
密封设计：
可保护操作者免受漏出紫外光的辐射。
先进的暗箱技术，操作安全。
多种光源可选：
可由触措键控制开关的四种淘汰312nmUV、254nmUV、365nmUV及白光，扩展了应用范围。
推拉式工作台：
方便装卸清洁，易于实验操作，人性化设计。
独特的风扇及密闭风道设计：
紫外工作台及主机装备有排风风扇，主机侧壁内有SIM独家专利设计的密闭排风通道，有效降低室内温度，最大程序减小对样品的影响，避免测试过高使胶弥散过快。
密封设计：
可保护操作者免受漏出紫外光的辐射。
先进的暗箱技术，操作安全：
密封效果好保证了图片的获取和UV的传说。
凝胶成像一般操作步骤
1.打开凝胶成像系统开关。
2.打开电脑，系统自动打开并进入成像软件。
3.打开凝胶成像系统前面板，选择使用紫外透射光源或者白光透射光源，将相应光源安放到位。
4.将样品放置在透射光源的样品台上。
5.在成像操作界面里面选择使用Upper white光源，点击绿色(即时成像)按钮。
常见问题
1、是不是像素越高，产品就越好?
像素是要针对成像设备来看的，比如数码相机与CCD的像素就不具备可比性，其次CCD本身的质量比单纯的像素高低更重要。对于同级别CCD最重要的指标是其大小，也就是CCD尺寸，尺寸越大其本身价值就成几何倍地增长。
2、配件紫外反射灯源的主要用途为何?
紫外反射灯源使用并不广泛，主要是提供非透明材质的DNA跑胶载体如纸层析等的成像需要而使用。由于比较常用的还是透明的琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶，透射光源完全可以满足，因此将紫外反射光源作为选配件不列入标配中。
3、能否在凝胶成像上直接切胶?
凝胶成像可以，如需直接切胶，首先按系统中间的观察窗，打开装有进口防紫外玻璃的观察窗口，然后打开左右两侧专为割胶所设计的小门，即可进行切胶操作。
4、如何调节焦距 聚焦 光圈以获得高质量的图片?
三个最重要的可调参数分别是焦距 聚焦和光圈。其中焦距调节清晰度，聚焦调节图像大小，光圈调节明暗。一般先把光圈调节到适宜的亮度后，再调节聚焦将图像放到最大，最后调解焦距，在图像较大的情况下焦距比较容易调节到最清晰状态，然后再把图像缩放在适宜大小后成像即可。 |
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